一、细胞培养条件

细胞名称：SV40转染人成骨细胞HFOB119
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM/F12 + 0.3 mg/ml G418 + 10% FBS
传代方法：第一次建议1:2比例传代
传代情况：每2天换液
备注：用无菌离心管收集培养基，并留作对照使用；如对比效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，应在良好培养状态下灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收到细胞后，用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后放置在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入35℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后进行后续处理。显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议40x、100x和200x各一张），前三天的照片将作为重要的售后依据，未提供照片的默认细胞状态良好。传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自制完全培养基以便进行对比培养，换液后松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞未超过80%汇合度，收集瓶中的完全培养液至离心管中，保留5ml完全培养基，并放入35℃、5% CO2孵箱培养；如果细胞密度超过80%，即可进行传代，具体步骤如下：

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
添加0.25%胰酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于35℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台并轻敲培养瓶，加5ml以上完全培养基终止消化。
轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
根据1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新培养基至5-8ml/瓶，最后放入35℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃掉培养液，用PBS清洗细胞一次。
添加0.25%胰酶消化液约1ml，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，并轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃去上清，加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若需转入液氮罐，则需先在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护面具），迅速置入35℃水浴中解冻，直至无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
细胞转入含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃去上清，沉淀重悬于5ml完全培养基，接种至T25培养瓶，放入35℃、5% CO2细胞培养箱中。
次日更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞在运输过程中可能容易脱落，这是正常现象。如脱落较多，可参考以下处理方式：将培养瓶内所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养。沉淀再加入胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。然后再进行离心处理，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。之后按1:2比例分瓶传代（两个T25），并补充新培养基至5-8ml/瓶，放入35℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1) 细胞问题可重发的情况及判定标准

细胞在运输过程中出现丢失、瓶身破损或培养液严重漏液等问题，将予以重发。
如收到细胞后48小时内出现污染问题，需提供真实实验结果以核实后重发。
常温发货的细胞在静置24小时后或干冰发货的细胞复苏后24小时内绝大多数细胞未存活（需提供清晰的细胞状态照片），将予以重发。
干冰发货的细胞复苏后24小时内或常温发货的细胞静置4小时且未开封出现污染，予以重发。
如细胞活性存在问题，请在收到产品7天内提供真实实验结果，通过台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后重发。

2) 细胞问题不予重发的情况

由客户造成的细胞污染不予重发。
客户因不当操作导致细胞状态不佳不予重发。
使用非本库推荐的培养体系导致细胞状态不佳不予重发。
细胞状态不佳但未提供前3天照片者不予重发。
在培养期间经过其他处理的细胞不予重发。
收到细胞后2天内未告知问题者不予重发。
其他情况视具体情况而定。

选择尊龙凯时，确保您的细胞培养高效可靠，让生物医学研究更上一层楼。